Biochemische Labormethoden (Springer Labormanuale) (German by Martin Holtzhauer

By Martin Holtzhauer

Martin Holtzhauer hat in seinem Werk biochemische Methoden und Stoffdaten zusammengestellt. In shape von überprüften Laborvorschriften wurden vielseitig einsetzbare Arbeitsanleitungen für die analytische Proteinbiochemie sowie ausgewählte Beispiele für präparatives Arbeiten aufgenommen und mit zahlreichen Tabellen ergänzt. Um eine leichte Handhabung zu gewährleisten, wurde auf theoretische Einführungen in die jeweiligen Methoden weitestgehend verzichtet und statt dessen auf Spezialliteratur verwiesen. Das Methodenspektrum reicht von quantitativen Bestimmungsmethoden über elektrophoretische und immunchemische Protokolle bis zu Rezeptor- und Enzymassays, von allgemeinen praktischen Hinweisen zu chromatographischen Verfahren bis zu Beispielen mehrstufiger Proteinisolierungen.

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Wasser 2 % Harnstoff (w/v) in dest. Wasser (Reagens nach AufschluB) B, C und dest. Wasser werden im Verhaltnis 1:1:8 gemischt E' (Reagens ohne vorhergehenden AufschluB) A, B, C und de st. Wasser werden im Verhaltnis 1:1:1:7 gemischt E und E' sind nur einen Tag haltbar. Losungen 22 1 Quantitative Methoden AufschluB Aufschlu6 (Veraschung): Der Aufschlu6 wird durchgefiihrt, wenn das Phosphat min destens teilweise kovalent gebunden in Nucleinsauren, Nucleotiden, Phosphoproteine usw. vorliegt. Zur 1 bis 2 ml wa6riger Probe werden 0,2 ml konz.

Anschlie6end kann wie ublich fixiert und gefarbt werden oder die Proteine bzw. Peptide werden im Western blot transferiert. JAGOW (1987) Anal. SCHAGGER (1994) A Practical Guide to Membrane Protein Purification. 4 In diesem System konnen alkalilabile Proteine (z. B. Acylphosphat-Phosphoproteine) unter denaturierenden Bedingungen entsprechend ihrer relativen Molmasse aufgetrennt werden. Trotz der relativ geringen Polyacrylamidkonzentration (T = 5,61 %, C = 3,61 %) ist die Trennung im Molmassenbereieh zwischen 10 und 150 kD sehr gut.

Wasser auf 9,95 ml 0,05 T=20,0 %, C=5 % 4,75 3,75 0,05 0,05 Glycerol auf 9,95 ml 0,05 a Die Mengen an Losung A bzw. A fur andere Gradientenzusammensetzungen sind analog vorstehender Tabelle zu wahlen Sulfosalicylsaure (w/v) oder in Eisessig-Methanol-Wasser (1:3:6, v/v/v) fixiert. Ein sofortiges Einlegen in die Farbelosung ist moglich, aber hinsichtlich der mehrfachen Verwendbarkeit der Farbelosung (Farbemethoden s. Abschn. 9) nicht zu empfehlen. Besondere Aufmerksamkeit ist der Interpretation von Elektropherogrammen zu widmen, die von Proben mit einem hohen Anteil an nichtionischen Detergenzien (Tensiden) mit geringer kritischer Mizellkonzentration (vgl.

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